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氯化铵甘草合剂微生物限度检查方法的验证

论文核心提示:

目的:建立氯化铵甘草合剂微生物限度检查的方法。方法:细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查均采用常规法进行验证[1]。结果:用常规法检查细菌、霉菌、酵母菌,菌落回收率均高于70%,用常规法检查控制菌,试验组检出,阴性对照组未检出。结论:氯化铵甘草合剂无抑菌作用,可用常规法进行微生物限度检查。

论文关键字:   氯化铵甘草合剂  微生物限度检查

药品微生物限度检查法建立时应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证,以确认所采用的方法是否适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定和控制菌检查。系统的方法学验证可以避免因为选择方法不合理而造成漏检、误判,以保证结果的科学可靠[2,3]。
1材料
1.1  主要仪器、药品
仪器:医用净化工作台YJ—875(苏州净化设备厂),电热恒温培养箱HH—B11·500(上海市跃进医疗器械一厂),霉菌培养箱XL—3(上海虹浦仪器厂)等。药品:氯化铵甘草合剂(批号:080108,180ml/瓶,苏州市中医医院)。
1.2  培养基及稀释剂
营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基、pH 7.0氯化钠蛋白胨缓冲液均由北京三药科技开发公司提供。
1.3  验证试验用菌种
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(B)98001]、黑曲霉[CMCC(B)98003],均由江苏省药品检验所提供,以上菌种所用菌株均未超过5代。
2   方法与结果
2.1  细菌、酵母菌及霉菌计数方法的验证
⑴供试液的制备
取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml,混匀,制成1:10的供试液。
⑵菌液的制备
        ①  大肠埃希菌                                                           
金黄色葡萄球菌 →新鲜培养物接种至营养肉汤培养基,30℃~35℃培养18~                                              
枯草芽胞杆菌  
               
24小时,取1mL营养肉汤培养物至9mL0.9%无菌氯化钠中[1],10倍稀释至10-5~10-7之间。
② 白色念珠菌  新鲜培养物接种至改良马丁培养基,23℃~28℃培养24~48小时,取1mL营养肉汤培养物至9mL0.9%无菌氯化钠中[1],10倍稀释至10_6。
③ 黑曲霉  新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基,23℃~28℃培养5~7天,用5mL0.9%无菌氯化钠将孢子洗脱,无菌纱布过滤孢子悬液,取1mL孢子悬液至9mL0.9%无菌氯化钠中[1],10倍稀释至10-5。
⑶菌落计数方法的验证:常规法
试验组:取1:10供试液1mL,分别加入10个平皿中,再依次加入以上5种菌
的菌悬液1mL(含50~100cfu),每株菌平行制备2个平皿,立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基,分别置30℃~35℃培养48小时和23℃~28℃培养72小时计数。
②  菌液组:分别取上述稀释的菌悬液1mL注入平皿内,每株菌平行制备2个平皿,
立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基,分别置30℃~35℃培养48小时和23℃~28℃培养72小时计数。
③  供试品对照组:取1:10供试液1mL分别注入4个平皿中,立刻倾注营养
琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基,每种培养基制备2个平皿,分别置30℃~35℃培养48小时和23℃~28℃培养72小时计数[1]。
⑷实验结果见表1、   转贴于 世纪论文网 http://www.21cnlunwen.com

[本论文关键字]:   氯化铵甘草合剂  微生物限度检查

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